不同产地五指毛桃GC-MS色谱指纹图谱的聚类分析

江敏 陈志维 梁丽欣  许晓峰

                            （广州中医药大学中药学院）

摘要 目的 建立不同产地五指毛桃药材的GC-MS指纹图谱研究方法并进行聚类分析。方法 ① 采用GC－MS法对不同产地(韶关、清远、从化、帽峰山、湛江、揭阳、河源)，及河源不同采收年份(1、2、3、4年生)，不同采收季节品种共15个五指毛桃样品进行分析。② 根据GC-MS指纹图谱以未鉴定成分X、补骨脂素、十六酸、佛手内酯、油酸、亚油酸、十八酸等主要成分的相对百分含量为分析对象，对15个五指毛桃样品进行聚类分析。结果 ①方法学考察结果表明，本研究建立的分析方法有较好的重现性。②根据聚类分析结果，可将五指毛桃药材分为2大类，河源、韶关、河源（4年）、河源（10月）聚为一类；其余样品归为第二类。结论 不同产地五指毛桃质量存在差别，该指纹图谱研究及聚类分析方法可用于控制五指毛桃药材质量。

关键词  五指毛桃；指纹图谱；聚类分析；气质联用

前言

五指毛桃为桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vahlde.的干燥根。华南地区习用中药材，别名五爪龙、南芪、土北芪等。五指毛桃味辛、甘，性平，具有健脾益气、化湿行气之功效。用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿痹痛、肝炎、白带、产后无乳^[1]。本品除药用外，在广东民间大量食用，香味浓郁，深受客家民众喜爱。为探讨其芳香来源，刘春玲等曾采用水蒸气蒸馏制取挥发性成分进行GC-MS分析，结果显示挥发油含量仅为0.025～0.03ml/lOOg，且组分除含大量脂肪酸外，未见有明显特征性成分^[2]。再进一步采用乙醚、乙醇提取，经GC－MS分析，发现乙醇提取物组分较有特征性，含有大量的补骨脂素、佛手内酯等香豆素类物质。游离的香豆素溶于沸水，从而散发出香气^[3，4]。本研究在前人研究的基础上，收集15个五指毛桃样品药材，以乙醇提取，经GC-MS分析指纹图谱，并进行聚类分析归类，进一步完善五指毛桃的质量评价标准，现报道如下。

1.1仪器与试药

Agilent GCMS—8653N型气相色谱质谱联用仪；针筒式微孔滤膜过滤器由天津市腾达过滤器厂生产；乙醚、乙醇等试剂均为分析纯。

1.2样品

不同产地的五指毛桃采集于原产地野生品种，其它样品均采自于河源五指毛桃种植基地，样品经广州中医药大学药植鉴定教研室鉴定为粗叶榕Ficus hirta Vahl.的根，洗净，晾干，粉碎后干燥保存待测（见表1）。

表1

药材样品一览表

2．方法

2.1 样品制备

取五指毛桃粗粉3g，置10ml具塞试管中，加乙醇至10ml，超声提取30min。室温静置挥发至上清液约1ml左右，密闭冰箱中保存供分析用。

2.2 色谱条件

GC：DB－1石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm)；进样口温度250℃，接口温度230℃；载气为高纯度氦气，流速为1.3mL/min；柱前压为80kPa，分流比3:1，进样量为1.0μl；峰面积归一法计算各化合物的相对含量；升温程序：柱温60℃，平衡3min，以10℃/min的速率升到280℃，保持3min，可达到较好分离。

MS：EI源(70ev)，双灯丝；质量范围m/z 40—400全程扫描，扫描间歇1.0s。

2.3 样品检测

取每批次样品1ml针筒式微孔滤膜过滤，取1.0μl进样分析，总离子流图见图1。通过计算机自动检索与标准图谱对照，在16.5～23min时段，鉴定了其中6个化合物：未鉴定成分X、补骨脂素、十六酸、佛手内酯、亚油酸+油酸、十八酸并测定计算了以上6个成分的含量（结果见图1，表2）。

2.4 聚类分析

利用国产DPS v7.55版数据统计分析软件以未鉴定成分X、补骨脂素、十六酸、佛手内酯、亚油酸+油酸、十八酸6个活性成分的相对百分含量为分析对象，对15批样品进行系统聚类分析（聚类距离：欧氏距离；聚类方法：最长距离法）。

4．讨论

目前中药通常分析其中的有机成分和无机成分。指纹图谱的选择可以是包括光谱指纹图谱(如：IR、UV等)和色谱指纹图谱(如：2D—TLC、GC、HPLC、CE等)及微量元素指纹图谱等^5，6]。在药效、毒理、临床试验已经确认该品种安全有效的前提下，凭借实用的指纹图谱(或图像)既可以确认产品的真伪，同时又能判断质量的稳定与否。虽然它不能代替含量测定，但比测定任何单一成分所提供的信息却丰富和有用得多。聚类分析是数理统计的一种方法，特别适用样品的归属不清楚的问题，根据是同类样品在空间的距离较小，聚类分析称为无监督的分类。中药中成分复杂，单一中药通常具有十几个到几十个不同的成分，有的成分稳定，但有的成分不稳定。指纹图谱的意义就是选取能代表该药的性质的成分，指纹峰是稳定的，其保留时间和相对峰面积在二维空间应该聚集在很小的范围，即可以聚为一类。

据调查，药农采收五指毛桃的经验是，一般为3～4年，采收的季节选择秋季。

综合聚类分析结果GC-MS数据分析结果，发现两种方法的分析结果基本相同。药农的实际经验(3～4年、秋季采、细叶型)与补骨脂素、佛手内酯的相对含量呈现明显相关性，尤其补骨脂素的含量均显著增高，可见补骨脂素应是五指毛桃指标成分群中最有价值的质量评价指标，其次为佛手内酯。

5．结论

在不同产地的五指毛桃质量比较中，以河源与韶关所产的五指毛桃的质量较好；在河源产的不同种植年份的五指毛桃中以四年生五指毛桃的质量较好；在采收季节的考察方面，以10月份采收质量较好。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典[M]．北京：人民卫生出版社，1977．90．

[2] 刘春玲， 魏刚， 何建雄，等.五指毛桃不同采收部位挥发油及醇提物成分的分析[J]. 广州中医药大学学报，2004，21（3），204～210.

[3] 魏刚，刘春玲，何建雄，等．五指毛桃GC-MS特征指标成分群探讨[J]．中医药学刊，2005，23（7）：1249-1251.

[4] 刘春玲，徐鸿华，许晓峰，等．高效液相色谱法测定五指毛桃中补骨脂素的含量[J]．中药材，2004，27（8）582－583.

[5] 罗国安，王义明，曹进，多维多息特征谱及其应用[J]．中成药，2000，22(6)：395—397．

[6] 祁俊生，徐辉碧，周井炎，等．中药方剂中微量元素与四性关系的研究[J]．分析科学学报，1998，14(4)：283—287．